PCR檢測試劑盒使用前后的注意事項(xiàng)
PCR檢測試劑盒里分好幾部分，重要的是PCR反應(yīng)體系：DNA聚合酶，鎂離子，引物（測2個基因和1個內(nèi)標(biāo)需要3對引物），探針（也要3對探針，發(fā)出三種波長的熒光），逆轉(zhuǎn)錄酶，dNTP（ATUCG會用部分U代替T），還有用于抗干擾的UDG酶（正常的DNA只有ATCG，PCR擴(kuò)增出來的DNA會有AT（會用部分U代替T）CG，這樣擴(kuò)增出來的DNA鏈中有U，UDG酶能切斷含U的DNA鏈，所以擴(kuò)增DNA在空氣中形成的氣溶膠，不會影響其他樣本）、RNA酶抑制劑（空氣中液體里全都是RNA酶，會降解病毒的RNA）、Taq酶的抗體（Hotstart，常溫下能抑制Taq酶的活性，PCR擴(kuò)增時高溫讓其失活，Taq酶就在高溫時恢復(fù)活性開始擴(kuò)增了）。
一、試劑盒使用注意事項(xiàng)
?。?）所有試劑應(yīng)按照適合溫度儲存。請勿反復(fù)凍融。
?。?）使用后均需要對操作區(qū)進(jìn)行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無酶耗材。
二、樣本注意事項(xiàng)
?。?）細(xì)胞在含/不含血清的環(huán)境中均可直接使用試劑盒。
?。?）擴(kuò)增2kb以內(nèi)片段，細(xì)胞樣品濃度不超過1000個細(xì)胞。如若擴(kuò)增片段超過2kb，可適當(dāng)提高細(xì)胞濃度。
?。?）不同組織使用不同的眼科剪和眼科鑷進(jìn)行處理，防止交叉污染導(dǎo)致檢測結(jié)果偏差。
三、試劑盒使用過程中注意事項(xiàng)
?。?）PCR過程中推薦使用陰性對照和陽性對照。
?。?）整個過程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中，防止形成環(huán)境污染。
?。?）PCR產(chǎn)物3’末端含有A，可直接進(jìn)行TA克隆。
四、試劑盒使用后注意事項(xiàng)
?。?）PCR反應(yīng)完成后，嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)區(qū)開蓋。應(yīng)在污染區(qū)進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，防止氣溶膠污染。
?。?）為防止試劑盒污染，請勿將不同批號試劑盒混用。
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