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揭示KPNA7蛋白在小鼠胚胎發(fā)育的功能
更新時間:2012-02-23   點擊次數(shù):1835次

卵母細(xì)胞和受精卵中存在著多種具有組織特異性和時間特異性表達(dá)的核因子。核轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)以及該系統(tǒng)所轉(zhuǎn)運(yùn)的多種核因子在細(xì)胞核(基因組)重編程以及受精卵基因(組)活化過程中扮演著重要角色。對受精前后入核轉(zhuǎn)運(yùn)的了解有助于人們探求精卵結(jié)合(受精)之后,作為全新生命開始的受精卵胚胎的內(nèi)在啟動過程。
卵到胚胎的轉(zhuǎn)化過程中,人們一直不知道眾多核因子是通過已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的核轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)家族成員介導(dǎo)入核還是由特異的組織特異性和時間特異性表達(dá)的核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)入核。大規(guī)?;蚪M測序的完成和基因表達(dá)譜的測定使得發(fā)現(xiàn)新的核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族成員提供了更多機(jī)會。通過對小鼠卵母細(xì)胞和受精卵基因表達(dá)譜的分析,高紹榮研究小組發(fā)現(xiàn)并鑒定了一個新的入核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族新成員:KPNA7。KPNA7 主要在卵母細(xì)胞和受精卵中高水平表達(dá)。受精卵分裂為2-細(xì)胞胚胎之后,KPNA7表達(dá)水平急劇下降。特異抗體染色顯示,KPNA7蛋白主要定位于細(xì)胞核或有絲分裂中期紡錘體。為了確定KPNA7在小鼠生殖和發(fā)育過程中是否扮演著重要角色,高紹榮小組制備了Kpna7基因的基因敲除小鼠。
體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn),Kpna7基因敲除之后,雌性小鼠繁殖力明顯下降,同時伴隨著子代小鼠性別比例失衡。這些研究結(jié)果表明,作為入核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的一個新成員,KPNA7蛋白對于小鼠維持繁殖力是必須的。進(jìn)一步的體外研究發(fā)現(xiàn),雌性Kpna7敲除小鼠的卵母細(xì)胞存在明顯缺陷。雌性Kpna7敲除小鼠分離的卵母細(xì)胞經(jīng)過孤雌活化之后,其細(xì)胞周期失控而明顯加快,但zui終在體外培養(yǎng)環(huán)境下,不能像正常對照組一樣,發(fā)育到囊胚期。RT-PCR分析發(fā)現(xiàn), Kpna7基因敲除導(dǎo)致Dppa2、Dppa4和Piwil2等多個轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)異常下調(diào),而Hdac3表達(dá)異常上調(diào)。表觀遺傳學(xué)分析發(fā)現(xiàn),Kpna7基因敲除引起*基化組蛋白H3K27me3的修飾水平明顯下調(diào)。生物化學(xué)實驗表明,KPNA7與KPNB1具有很強(qiáng)的結(jié)合,從而提示KPNA7通過與KPNB1共同介導(dǎo)由卵到胚胎轉(zhuǎn)化過程中的重要核因子的入核。

 

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